本文標(biāo)題："酵母菌株-釀酒酵母微觀分析圖像顯微鏡"
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酵母菌株-釀酒酵母微觀分析圖像顯微鏡
研究粉已經(jīng)被分泌的淀粉酶水解者從泡盛酒曲霉(Aspergillusawam
ori)分離了全長的葡萄糖淀粉酶的cDNA，克隆到釀酒酵母質(zhì)粒上，
并受到酵母烯醇酶EN01基因啟動子和轉(zhuǎn)錄終止子的調(diào)控。實驗室構(gòu)
建的一種攜帶葡萄糖淀粉酶cDNA質(zhì)粒的釀酒酵母具有這種活性，可
以將可溶的淀粉發(fā)酵成為酒精，這表明上述方法可行。
但遺憾的是，這種實驗室釀酒酵母菌株的某些性質(zhì)不適用于商
業(yè)生產(chǎn)，比；如它不耐高濃度的酒精；不能有效表達(dá)葡萄糖淀粉酶
cDNA；在沒有維持質(zhì)粒存在的特殊條件(選擇壓力)下，將大量遺失
質(zhì)粒。這些問題并不是難以克服的，首先通過消除質(zhì)粒上EN01啟動
子上175 bp的負(fù)調(diào)控區(qū)域，葡萄糖淀粉酶的表達(dá)水平幾乎增加了5
倍；其次通過消除酵母的復(fù)制起點，添加與酵母染色體同源的DNA
片段，構(gòu)建整合型載體。這種形式的質(zhì)粒，能將完整的葡萄糖淀粉
酶基因整合進(jìn)入染色體位點，穩(wěn)定保存。還可以利用另一種耐酒精
的釀酒酵母(啤酒酵母)作為宿主菌，轉(zhuǎn)化整合型載體。
通過這些改造，研究者制造了兩種新的酵母菌株。這些菌株比
天然存在分解淀粉的凝聚性酒精酵母(Saccharomycesdiastaticus)
更好，該酵母與釀酒酵母相近，可以水解和發(fā)酵可溶性淀粉(表13
．4)。帶有整合型葡萄糖淀粉酶基因的啤酒酵母效果優(yōu)于多拷貝游
離型基因的實驗室菌株。這種差異反映了質(zhì)粒的不穩(wěn)定性造成葡萄
糖淀粉酶基因的丟失。只有轉(zhuǎn)入克隆的葡萄糖淀粉酶基因，實驗室
菌株和釀酒酵母的啤酒酵母菌株才能利用可溶性淀粉。不論是游離
還是整合，泡盛酒曲霉葡萄糖淀粉酶的cDNA都是在正N01，調(diào)控信
號的控制之下，其中去除了175 bp的負(fù)調(diào)控區(qū)域。質(zhì)粒在選擇壓力
下保存。
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